【收藏】如何用ImageJ处理WB条带

一、免疫印迹（western blot）灰度值（gray scale）计算实操

1. 打开 image J；

（图1 image J打开界面）

2. 打开需要分析的图片：“file- open- 找到图片”；

（图2 打开需要分析图片界面展示）

3. 将图片转换为灰度图：“image- type- 8 bit”；

（图3 western blot 图片转换为灰度图设置）

4. 将图片背景灰度统一：“process- Subtract Background”，然后将“rolling ball radius，参数设置为50”，复选框选中light background；此处的设置能够消除背景的影响；

（图4 图片背景灰度统一设置）

（图5 图片背景灰度统一设置参数调整）

（图6 完成灰度背景统一设置后图片展示）

5. 翻转图片的黑白：“edit- invert”；

（图7 图片黑白翻转设置）

（图8 图片黑白翻转后展示）

6. 分析测量设置：“Analyze>Set Measurements，选择Area面积、平均灰度值Mean gray value、极大小灰度值 min& max gray value、积分灰度值Integrated dendity”；

（图9 测量参数设置命令操作）

（图10 参量参数复选框设置）

7. 将测量的单位设置为像素 pixels：“analyze- set scale”；

（图11 测量单位定义为像素 pixels设置）

（图12 设置为像素的相关设置，并定义到全部Global）

8. 条带的选择和对应光密度的测量：图中红色箭头指向，分别表示举行，椭圆、和不规则图形，一般用矩形选框；

（图13 选择条带的框）

9. 测量印记的灰度值，使用矩形/椭圆/不规则选框选择需要测量的印记，然后使用快捷键（ctrl + M）或者菜单命令“analyze- measure”；

（图14 选中需要测量的印记条带）

（图15 测量结果展示，红框标记部分IntDen即为本次测量的光密度数值）

或者用另一种方法计算灰度值：在工具栏中选择矩形工具——Rectangular, 最左边的为矩形工具，选择条带。键盘上按数字1，弹出如下提示框：

点Yes，键盘上按数字3，得到如下：

工具栏中选择直线工具——Straight，下图最右边的为直线工具，按住Shift键使用直线工具画竖线将峰进行分割：

选择魔棒工具——Wand tool，分别点击分割好的峰，即可得到结果。

10. 数据导出：file- save as；

11. 将所得数据放入Graphpad prism绘图即可。

二、拉直Western Blot偏斜条带

1. ImageJ软件打开上述图片，选择下图红框所示Segmented line沿着倾斜条带画间断线段：

2. 鼠标双击Segmented line，设置线段的宽度至包含所有条带：

3. 点击菜单栏Edit，Selection，Straighten，倾斜的WB条带即可拉直：

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你学会了吗？